Gramo dėmė. Mikro stiklelių dažymas

Visos žinomos bakterijos skirstomos į teigiamas ir neigiamas pagal jų gebėjimą dažytis Gramo metodu. Šis padalijimas priklauso nuo jų ląstelės sienelės struktūrinių ypatybių ir spalvos.

Šis metodas leidžia suskirstyti visus tipus, atsižvelgiant į mikroorganizmo ląstelės išorinio apvalkalo struktūros tankį:

• atsparesnis smūgiams aplinką, antibiotikų įtaka;
• mažiau stabilus.

Pirmasis mokslininkas, pasiūlęs, kad kai kurie anksčiau tik botanikoje naudojami metodai gali būti naudojami mikrobiologijoje, buvo Robertas Kochas.

1884 m. Christianas Gramas, danų biologas, besispecializuojantis audinių dažymo srityje, pirmą kartą išbandė dažymo diferencijavimo metodą.

Šis atradimas leido suskirstyti visus esamus mikroorganizmų tipus į gramteigiamus ir gramneigiamus, o tai buvo postūmis naujam mokslo raidos etapui šioje srityje. mikrobiologiniai tyrimai. Tai taip pat leido nustatyti patogeninių rūšių atsparumą vaistai, numatyti jų elgesį, o svarbiausia – sukurti naujos kartos antibiotikus, galinčius nugalėti ligą.

Ląstelės sienelės struktūra

Bet kurios bakterijos apvalkalas susideda iš specialios medžiagos – mureino. Jo molekulė susideda iš lygiagrečiai išsidėsčiusių polisacharidų grandinių. Polisacharidai, savo ruožtu, yra tarpusavyje sujungti aminorūgščių grandinėmis, išdėstytomis kryžmai.

Šis ryšys lemia apvalkalo tvirtumą, elastingumą, gebėjimą išlaikyti formą. Tam tikras austas tinklelis apsaugo vidinį mikroorganizmo sluoksnį nuo žalingų veiksnių poveikio ir neleidžia vandeniui patekti į vidų. Tuo pačiu metu tarpai tarp grandinių leidžia ląstelei įsisavinti maistines medžiagas, pavyzdžiui, poras.

Gramteigiamų mikroorganizmų apvalkalas yra storesnis ir stipresnis, o tai yra dėl baltymų įtraukimo į jo sudėtį.

Neigiamose rūšyse ląstelės membranos struktūra yra daug sudėtingesnė, o tai leidžia apsaugoti ją nuo tokios aplinkos, kaip seilės, skrandžio sultys ir kiti skysčiai, kuriuose yra lizocimo, antibakterinių savybių turinčio fermento, poveikio. Iš išorės plonesnį apvalkalą gaubia lipidų ir polisacharidų plėvelė – lygus paviršinis sluoksnis.

Gramo metodo esmė

Gramo metodo pagrindas yra bakterijų padalijimo į mikroorganizmus su „pliuso“ ir „minuso“ ženklais pagal Gramą principas, pagrįstas skirtinga mikroorganizmų ląstelių sienelių chemine sudėtimi.

Norint nustatyti gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, vaistas, užteptas ant stiklo plonu vienodu sluoksniu, pirmiausia fiksuojamas kaitinant virš degiklio. Tada jie dažomi anilino dažais – metilo violetine. Po to jis tvirtinamas jodu, leidžiamas išdžiūti ir nuplaunamas alkoholiu.

• Gramteigiamos (Gram+) rūšys įgauna ryškiai mėlyną spalvą.
• Gramneigiamos (Gram –) bakterijos pasikeičia.

Paskutinis žingsnis yra nudažyti preparatą raudonais kontrastiniais dažais, kurie leidžia gauti gramneigiamus raudonos arba rausvos spalvos mikroorganizmus. Taip yra dėl to, kad dažai negali prasiskverbti į ląstelę dėl storo išorinio sluoksnio, nudažydami tik paviršių.

Negyvi mikrobai įgauna ryškesnę spalvą, palyginti su gyvais.

Gramteigiamų bakterijų charakteristikos

Dauguma gramteigiamų bakterijų yra patogeniškos žmonėms. Tai yra pavojingų ligų sukėlėjai:

1. Streptococcus (Streptococcus), sukeliantis tonzilitą, faringitą, reumatą.
2. Stafilokokas (Staphylococcus) yra apsinuodijimo krauju ir pūlingų odos ligų sukėlėjas.
3. Listeria, sukelianti listeriozę – smegenų uždegimą.
4. Bacilos (Bacillus) yra toksinių infekcijų, juodligės, sukėlėjai.
5. Klostridijos (Clostridium), sukeliančios botulizmą, stabligę, dujų gangreną.

Paskutinės dvi rūšys yra sporas formuojantys anaerobai, likusios negali sudaryti sporų. Kai kurie gali nudažyti tik aktyvaus augimo fazėje.

Gramneigiamos bakterijos

Tai bakterijos, kurios visiškai pakeičia spalvą po plovimo alkoholiu; Dėl pakartotinio dažymo safraninu jie įgauna rausvą arba ryškiai raudoną spalvą. Jie yra atsparesni antikūnams nei Gram+ rūšys.

Gramneigiamos bakterijos daugiausia apima oportunistines bakterijas, kurios gali sukelti uždegiminiai procesai ir imuninis atsakas žmogaus organizme tam tikromis sąlygomis. Jų ląstelių membrana, susidedanti iš lipopolisacharido sluoksnio, sukelia citokinų sintezę, o tai prisideda prie toksinų padidėjimo uždegimo vietoje. Vėliau toksinai, pernešami per kraują, turintys nuodingą poveikį, sukelia sunkius apsinuodijimo simptomus.

Svarbus Gramo metodo vaidmuo diagnozuojant ligas

Metodas, leidžiantis atskirti gramteigiamas ir neigiamas bakterijas, yra būtinas tiriant žmogaus biologinę medžiagą, siekiant nustatyti bakterinę infekciją.

Diagnostikai naudojama medžiaga:

• skrepliai leidžia klasifikuoti nosiaryklės mikrofloros sudėtį, aptikti patogenus;
• išmatų tyrimais nustatomi gramteigiamų rūšių gaminami toksinai;
• makšties tepinėlis leidžia apskaičiuoti gramneigiamų ir teigiamų mikrobų procentą bakteriniam vaginitui diagnozuoti;
• pleuros, sinovijos, perinataliniai skysčiai taip pat gana informatyvūs.

Christiano Gramo įdiegtas metodas leido mokslui padaryti didelę pažangą žinant apie mikrobų struktūrą ir jų apsauginius mechanizmus. Jis leido įdiegti tiksliausią bakterijų skirstymo į teigiamas ir neigiamas sistemą, kuri iki šiol naudojama diagnozuojant infekcines ligas.

Plačiausiai mikrobiologinėje praktikoje naudojamas metodas yra kompleksinis Gramo dažymo metodas (pirmą kartą 1884 m. pasiūlė danų mokslininkas H. Gramas). Metodas yra vienas iš svarbiausių identifikavimo požymių nustatant bakterijų tipą.

Gramo dažymo metodo esmė yra ta, kad visos bakterijos skirstomos į dvi grupes pagal jų gebėjimą dažytis dažais (gencijonine violetine arba krištoline violetine jodu). Vienai kategorijai priskiriamos bakterijos, kurių ląstelėse po apdorojimo alkoholiu išsaugomas šių dažiklių susidaręs kompleksas. Dėl dažymo tokios ląstelės įgauna tamsiai violetinę spalvą ir vadinamos gramteigiamos (gram+). Pavyzdžiui, sporas formuojančios genčių bakterijos - Bacillus, Clostridium, tarp nesudarančių bakterijų - Lactobacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Sarcina, Leuconostok ir kt.

Kitai grupei priskiriamos rūšys, kurios nesugeba išlaikyti dažų komplekso ir pakitusi spalva, veikiant alkoholiu. Jie vadinami gramneigiamais (gram-). Tai apima daugybę rūšių sporų nesudarančių lazdelės formos bakterijų, įskaitant. gentys Pseudomonas, Escherichia, Salmonella, Proteus ir kt.

Šiuo metu yra susijęs su ląstelių gebėjimu arba nesugebėjimu išlaikyti dažų kompleksą cheminė sudėtis ir bakterijų ląstelių sienelių struktūra. Gram+ bakterijų lukštuose yra daugiau mureino glikopeptido, polisacharidų ir teiko rūgščių. Jie turi gana tankią daugiasluoksnę struktūrą. Gram+ bakterijų ląstelėse gencijonas ir jodas sudaro stiprų junginį su citoplazma, kurio alkoholis neišskiria. Jie išlaiko violetinę gencijonų violetinę spalvą net ir papildomai dažydami Pfeiffer fuchsin.

Grambakterijų apvalkalai yra vienasluoksniai, juose yra daug lipidų lipoprotidų ir lipopolisacharidų pavidalu. Gram bakterijos pasikeičia, kai gydomos alkoholiu, nes juose gencijoninė violetinė nėra fiksuota citoplazmoje. Papildomai dažant fuksinu, bakterijų ląstelės nudažomos tik blyškiai rožinės spalvos.

Gram+ skiriasi nuo gram- ne tik požiūriu į spalvą, bet ir daugybe biologinių savybių bei savybių. Dauguma gram+ rūšių turi padidintą atsparumą dehidratacijai, terminiam apdorojimui, radioaktyviajai ir kitokio pobūdžio spinduliuotei. Tuo pačiu metu grambakterijos yra atsparesnės šarmams ir proteolitiniams fermentams, taip pat antibiotikams.

Maisto produktų užterštumo pašaliniu laipsniui nustatyti naudojamas dažymas gramais, įskaitant. sąlyginai patogeninė (žarnyno grupės) mikroflora, nustatyti antibiotikų veikimo diapazoną ir kitus tikslus. Reikėtų atsižvelgti į tai, kad kai kurios bakterijų rūšys, nors ir Gram+ jauname amžiuje, ne visos intensyviai dažosi Gram senose kultūrose. Todėl dažymui reikėtų paimti vienos ar dviejų dienų senumo kultūras, o papildomai palyginimui naudoti kontrolines kultūras (standartus), kurių ryšys su Gramo dažymu yra žinomas iš anksto.

Gramo dažymas atliekamas taip:

1. Ant vienos bakterijų kultūrų stiklelio paruošiami trys tepinėliai: žinomas gramteigiamas, bandomasis ir žinomas gramneigiamas.

2. Tepinėliai išdžiovinami ir fiksuojami liepsna.

3. Dažykite gencijonų violetinės spalvos karboliniu tirpalu 1-2 minutes.

4. Dažai pašalinami purtant, potėpius užtepamas Lugolio tirpalu (tirpalas J ir KJ) ir paliekamas 1-2 min. kol tepinėlis pasidarys juodas.

5. Nusausinkite Lugolio tirpalą ir ant preparato užlašinkite kelis lašus 96% alkoholio ir, šiek tiek pakratydami stiklinę, palaikykite, kol tepinėlis pašviesės. (20-30 sek.).

Vaistas nedelsiant nuplaunamas vandeniu. Viso dažymo rezultatas priklauso nuo tepinėlio apdorojimo alkoholiu: nepakankamai gydant visos bakterijos išlaiko dėmę, per daug apdorojus, visos ląstelės pakinta.

6. Be to, 2 minutes nudažykite preparatą Pfeiffer fuksinu (atskiestu fuksinu).

7. Dažai nuplaunami, preparatas išdžiovinamas ir žiūrima su 90x imersiniu lęšiu.

Jei preparatas paruoštas teisingai, tada matymo lauke matomos gram + tamsiai violetinės spalvos ląstelės, o šalia jų aiškiai matomos šviesiai rausvos gramų ląstelės.

Dažymas gramais yra pagrindinis bakteriologijos dažymo metodas. Morfologinių savybių aprašymas pradedamas dažymu Gramu. Šią šio metodo reikšmę lemia tai, kad bakterijos ląstelės Gramo dėmės priklauso nuo jos ląstelės sienelės struktūros tipo ir atitinkamai nuo to, ar ji priklauso Firmicutes ar Gracilicutes skyriui – pirmam bet kokios rūšies identifikavimo etapui. bakteriologijoje. Gramo dažymas atliekamas keturiais etapais.
A. Pirmajame etape fiksuotas tepinėlis nudažomas gencijonų violetine spalva.

1. Dažymas trunka 1 – 2 minutes.
2. Šiuo dažikliu mėlynai nudažomos ir gramteigiamos, ir gramneigiamos bakterijos.
B. Antrajame etape tepinėlis apdorojamas Lugolio tirpalu, kuris sudaro dažų kompleksą su gencijonu violetiniu, lokalizuotu citoplazminėje membranoje.
1. Gydymas Lugolio tirpalu trunka 1 - 2 minutes.
2. Tiek gramteigiamos, tiek gramneigiamos bakterijos šiame etape išlieka mėlynos.
B. Trečiajame etape tepinėlis balinamas alkoholiu.
1. Balinimas alkoholiu tęsiasi maždaug 20 sekundžių, po to gausiai nuplaunama vandeniu.
2. Per šį laiką gramteigiamos bakterijos nespėja išblukti ir išlikti mėlynos, o gramneigiamos bakterijos dėl plonesnio peptidoglikano sluoksnio, kuris neleidžia alkoholiui išplauti dažų komplekso pasikeičia, todėl tampa bespalvis.
D. Ketvirtajame etape tepinėlis nudažomas vandens fuksinu arba kitais raudonais dažais – safraninu.
1. Apdaila raudonais dažais trunka 1 – 2 minutes. Be to, šį etapą geriau pratęsti ilgiau, nes po balinimo bakterijų ląstelės sienelė dažus sugeria prasčiau nei įprastai.
2. Gram-teigiamos bakterijos išlieka mėlynos, nes jau yra nudažytos tamsesniu dažikliu, o gramneigiamos bakterijos, kurios ankstesniame etape buvo pakitusi spalva, šiame etape yra nudažytos raudonai. D. Gramteigiamos bakterijos sudaro mažumą tų bakterijų, kurias ištyrė medicinos mikrobiologija. Žemiau pateikiami pagrindiniai (šį sąrašą vėliau papildys sporų nesudarantys anaerobai).
1. Dauguma kokų (išskyrus Neisseria) yra gramteigiamos: stafilokokai, streptokokai ir pneumokokai, enterokokai.
2. Tarp gramteigiamų lazdelių yra Listeria, aktinomicetų serijos bakterijos (aktinomicetai, mikobakterijos, korinebakterijos), sporas formuojančios lazdelės (bacilos ir klostridijos).
E. Dauguma bakterijų, turinčių medicininę reikšmę, gramneigiamas. Tik kalbant apie mikoplazmas nėra teisinga kalbėti apie jų gramneigiamumą (nors pagal Gramą jos taip nusidažytų rožine spalva, nes praktikoje šis metodas nenaudojamas tiriant mikoplazmas). Faktas yra tas, kad gramteigiamos ir gramneigiamos bakterijos skiriasi viena nuo kitos ląstelės sienelės tipu (pirmiausia joje esančio peptidoglikano kiekiu), o mikoplazmos neturi ląstelės sienelės, kurioje būtų peptidoglikano.
1. Iš gramneigiamų kokosų Neisseria.
2. Dauguma lazdelių yra gramneigiamos (tiesą sakant, visos, išskyrus aukščiau išvardintus gramteigiamus).
3. Spirochetai taip pat turi gramneigiamą ląstelės sienelę.

(arba Gramo metodas)- empiriškai išvestas bakterijų atskyrimo metodas, nudažant jas tam tikru metodu į dvi dideles grupes: gramteigiamas ir gramneigiamas, kurios skiriasi savo ląstelės sienelės cheminėmis ir fizinėmis savybėmis.

Etimologija

Metodas pavadintas jo išradėjo, danų mokslininko Hanso Christiano Gramo (1853-1938), kuris 1884 metais sukūrė šį metodą bakterijoms atskirti, vardu. Pneumokokas Ir Klebsiella pneumoniae.

Naudojimas

Gramo beicas yra viena iš naudingiausių dažymo procedūrų laboratoriniai tyrimai mikrobiologijoje. Procedūra plačiai naudojama kaip gramneigiamų ir gramteigiamų bakterijų atskyrimo priemonė, dažniausiai tai pirmasis žingsnis nustatant konkretaus bakterijos mėginio tapatybę.

Medicinoje Gramo dėmės atliekamos atliekant kraujo tyrimus arba biopsijas, kai įtariama infekcija. Šis metodas yra daug greitesnis nei pasėlis ir yra ypač svarbus nustatant infekcijos tipą, kuris yra būtinas prognozuojant ir pasirenkant gydymą. Pavyzdžiui, diagnozuojant smegenų skystį dėl meningito ir sąnarių skystį dėl septinio artrito.

Analizuojant, pavyzdžiui, kokos ir sporines bakterijų formas, taip pat mieles, yra gramteigiamos ir nusidažo melsvai juodai (tamsiai mėlynai), dauguma kitų bakterijų yra gramneigiamos ir nusidažytos raudonai, eukariotinių ląstelių branduoliai. tampa ryškiai raudonos spalvos, o citoplazma yra rausva.

Dažymo technika

Gramo dažymas reiškia sudėtingą dažymo metodą, kai tepinėlis yra paveiktas dviem dažais, iš kurių vienas yra pirminis, o kitas yra papildomas. Be dažiklių sudėtinguose beicavimo metoduose naudojamos žievės nuėmimo medžiagos: alkoholis, rūgštys ir kt. Gramo dažymui dažnai naudojami trifenilmetano grupės dažai: gencijonas, metilo violetinis arba krištolinis violetinis. Gramteigiami (gram (+)) mikroorganizmai suteikia stiprų ryšį su nurodytais dažikliais ir jodu. Tuo pačiu metu, veikiami alkoholio, jie nepakeičia spalvos, dėl to, papildomai dažant Gram fuksinu (+), mikroorganizmai nepakeičia pirmosios prilipusios violetinės spalvos.

Gramneigiami (gramų (-)) mikroorganizmai sudaro junginius su pagrindiniais dažais ir jodu ir lengvai sunaikinami alkoholiu. Dėl to mikrobai pakinta spalva, o vėliau nusidažo fuksinu, pasidaro raudoni.

Medžiagos paruošimas dažymui

Bandoma medžiaga plonu sluoksniu paskirstoma ant gerai nuriebalinto stiklo paviršiaus. Paruoštas tepinėlis džiovinamas ore ir fiksuojamas visiškai išdžiūvus.

Fiksavimas

Fiksuojant tepinėlis fiksuojamas ant stiklo paviršiaus, todėl tolesnio preparato dažymo metu ląstelės nenusiplauna. Be to, nužudytos mikrobų ląstelės nudažosi geriau nei gyvos. Yra fizinis fiksavimo metodas, pagrįstas aukštos temperatūros poveikiu ląstelei, ir cheminiai metodai, kurių metu naudojamos cheminės medžiagos, sukeliančios citoplazmos baltymų koaguliaciją.

Fizinis tvirtinimo būdas Stiklas Paimkite vaistą pincetu ir sklandžiai perkelkite 2–3 kartus virš degiklio liepsnos viršaus. Visas fiksavimo procesas turi trukti ne ilgiau kaip 2 sekundes. Tvirtinimo patikimumas tikrinamas šiuo metodu: ant užpakalinio kairės rankos paviršiaus užtepamas dėmių neturintis stiklo paviršius. Tinkamai pritvirtintas stiklas turi būti karštas, bet nesukelti deginimo pojūčio (70-80 °C).

Cheminio fiksavimo metodas Skirtas Tepinėlių fiksavimui metilo alkoholis, acetonas, Nikiforovo mišinys (etilo alkoholio 96% ir anestezijos eterio mišinys santykiu 1:1), Carnoy skystis (etilo alkoholis 96% - 60%, chloroformas 30%, ledinė acto rūgštis sunaudojama 10 proc. Stiklinė su išdžiūvusiu tepinėliu panardinama į stiklinę su fiksuojančia medžiaga 10-15 minučių ir džiovinama ore.

Dažymo procesas

1. Vienas iš pagrindinių dažų užpilamas ant fiksuoto tepinėlio 2-3 minutes. Kad išvengtumėte nuosėdų, dažykite per filtravimo popierių.
2. Nusausinkite dažus ir atsargiai nuimkite filtravimo popierių. Tepinėlis 1-2 minutes pilamas Lugolio tirpalu arba jodido tirpalu pagal gramą (vandeninis kalio jodido ir kristalinio jodo tirpalas santykiu 2:1), kol preparatas pasidaro juodas.
3. Tirpalas nupilamas, tepinėlis išskalaujamas 96° etilo alkoholiu arba acetonu, pilant ir nusausinant, kol tepinėlis pasikeičia, o skystis nuteka ir tampa skaidrus (apie 20-40-60 sekundžių).
4. Kruopščiai nuplaukite stiklines tekančiame arba distiliuotame vandenyje 1-2 minutes.
5. Norint nustatyti gramneigiamas bakterijas, preparatai papildomai dažomi fuksinu arba safraninu (2-5 min.).
6. Nuplaukite tekančiu vandeniu ir nusausinkite filtravimo popieriumi.

Seminaras: Mikroskopinis gyvų (vietinių) ir dažytų mikrobų tyrimas.

Mikroskopinis metodas mikrobiologijoje. Metodiniai pagrindai.

Mikroskopija šviesos optiniu mikroskopu.

Šviesos mikroskopas susideda iš mechaninės ir optinės dalių. Mechaninė mikroskopo dalis yra trikojis, susidedantis iš pagrindo ir kolonėlės, prie kurios pritvirtintas vamzdelis ir scena. Kolonėlė turi dvi varžtų sistemas vamzdžiui montuoti. Optinę mikroskopo dalį sudaro apšvietimo aparatas, objektyvai ir okuliarai. Apšvietimo aparatas yra po objekto scena. Daugumoje mikroskopų šviesa atsispindi nuo veidrodžio ir, praeidama per kondensatoriaus lęšius, sufokusuojama bandinio plokštumoje. Šiuolaikiniuose mikroskopuose apšvietimas pasiekiamas naudojant mikroskope įmontuotą šviesos šaltinį. Lęšiai yra lęšių sistema metaliniame rėmelyje. Priekinis (priekinis) objektyvas yra mažiausias. Nuo to daugiausia priklauso mikroskopo padidinimas. Už jo esantys lęšiai vadinami korekciniais lęšiais, nes skirti optinio vaizdo trūkumams ištaisyti. Atliekant mikroskopiją lęšiukas panardinamas į lašelį aliejaus, todėl lęšis vadinamas imersiniu lęšiu (lot. immercio – immersion), o aliejus – imersine alyva. Panardinamasis lęšis reikalauja ypatingos priežiūros. Priekinis objektyvas turi tokį trumpą židinio nuotolį iki tiriamo objekto, kad objektyvą reikia nuleisti lėtai, žiūrint iš šono, kad nesutraiškytų mėginio, o tai susiję su objektyvo pažeidimu. Okuliarai turi du lęšius: viršutinis vadinamas akių lęšiu, o apatinis - kolektyviniu lęšiu. Okuliarai žymimi pagal jų teikiamą padidinimą, pavyzdžiui: x7, x10, x15 ir kt. Optinio mikroskopo skiriamoji geba yra 0,2 mikrono.

Mikroorganizmų dažymas- mikroorganizmų struktūros ir morfologijos tyrimo metodų rinkinys mikroskopuojant preparatus, paruoštus iš grynųjų kultūrų arba tiriamos medžiagos.

Fiksuotos bakterijos dažosi geriau nei gyvos, nes gyvos ląstelės ląstelės sienelė ir citoplazminė membrana riboja dažų įsiskverbimą į ją.

Spalvoto preparato paruošimas susideda iš kelių žingsnių:

1) tepinėlio ruošimas;

2) tepinėlio džiovinimas;

3) tepinėlio fiksavimas;

4) dažymas;

5) džiovinimas.

Ant švarių stiklelių paruošiamas tepinėlis, į kurio vidurį įlašinamas nedidelis vandens lašelis, į kurį bakteriologine kilpa įdedama tiriama medžiaga. Medžiaga ant stiklo pasiskirsto lygiu plonu sluoksniu, potėpio dydis 1-2 cm 2.

Vaistas paprastai džiovinamas kambario temperatūroje ore. Norint pagreitinti džiūvimą, tepinėlį galima pašildyti šilto oro srove aukštai virš degiklio liepsnos.

Išdžiūvusiame tepinėlyje atliekama fiksacija, kurios metu tepinėlis pritvirtinamas prie stiklo (fiksuojamas), mikrobai tampa jautresni dažymui. Yra daug būdų tai ištaisyti. Paprasčiausias ir labiausiai paplitęs yra šilumos fiksavimas - kaitinimas ant degiklio liepsnos (vaistas kelis kartus atliekamas per karščiausią degiklio liepsnos dalį). Kai kuriais atvejais jie naudojasi fiksavimu skysčiais (etilo arba metilo alkoholiu, acetonu, vienodo tūrio alkoholio ir eterio mišiniu - pasak Nikiforovo).

Po fiksavimo tepinėlis nudažomas. Preparatui tepamas dažų kiekis turi būti toks, kad padengtų visą tepinėlio paviršių. Pasibaigus dažymo laikui (2-5 min.), dažai nusausinami ir preparatas nuplaunamas vandeniu.

Yra paprasti, sudėtingi ir skirtingi mikrobų dažymo būdai. Paprastam dažymui dažniausiai naudojami vieni dažai, dažniausiai raudoni – purpuriniai arba mėlyni – metileno mėlyni. Fuksinas nudažo greičiau (1-2 min.), metileno mėlynasis – lėčiau (3-5 min.). Fuksinas ruošiamas koncentruoto karbolio tirpalo (Tsil's fuksino) pavidalu, kuris yra labai stabilus ir tinkamas dažyti daugelį mėnesių. Metileno mėlynasis yra iš anksto paruoštas prisotintame alkoholio tirpale, kuris yra stabilus ir gali būti laikomas ilgą laiką.

Pagrindiniai dažų tipai, naudojami mikrobiologinėje praktikoje:

Sudėtingi dažymo metodai, kuriuose naudojami du ar daugiau dažų, yra vertingi metodai mikrobiologinė diagnostika užkrečiamos ligos.

Gramo dažymo mechanizmas ir etapai

1. Ant fiksuoto tepinėlio užtepkite gencijonų violetinio karbolinio alkoholio tirpalą. Po 1 minutės ekspozicijos pereikite prie 2 veiksmo.

2. 1-2 minutes užtepkite Lugolio tirpalo (jodo).

3. Nuspalvinti etilo alkoholiu 30-60 sekundžių. kol nustos išeiti violetiniai dažų srautai.

4. Galima papildomai nuplauti tepinėlį vandeniu.

5. Baigti dažyti vandeninis tirpalas fuksinas 1-2 minutes,

6. Nuplaukite vandeniu, išdžiovinkite ir nuplaukite mikroskopu.

Gramteigiamos bakterijos nusidažo tamsiai violetine spalva, gramneigiamos – raudonai.