Gélose alcaline pour l'isolement de Vibrio cholerae. Média culturel

Est est une poudre jaune fine, hygroscopique et photosensible.

L'ensemble de réactifs doit assurer la croissance des souches de test Vibrio cholerae cholerae 01 groupe P-1 (145), Vibrio cholerae eltor 01 groupe M-878 (890), Vibrio cholerae non 01 P-9741 lors de l'inoculation de 0,1 ml de suspension microbienne de chaque souche d'essai après 12 à 14 heures d'incubation à une température de 37 °C sous forme de colonies lisses et translucides avec une teinte bleutée en lumière transmise. d'un diamètre d'au moins 1,0 mm.

Conçu pour isoler le microbe de la coqueluche du matériel infecté et des souches de culture.

Composé: hydrolysat de caséine pancréatique, chlorure de sodium, carbonate de sodium, phosphate disodique anhydre, extrait de levure alimentaire, gélose microbiologique.

Préparation: le milieu nutritif dans la quantité indiquée sur l'étiquette est soigneusement mélangé dans 1 litre d'eau distillée, bouilli pendant 2-3 minutes, en remuant de temps en temps, jusqu'à ce que la gélose soit complètement fondue. Filtrer sur filtre en gaze de coton, verser dans des flacons et stériliser en autoclave pendant 20 minutes à une température de 120°C.

Désignation 10733-00005

Milieu nutritif Agar alcalin Description

Gélose alcaline milieu nutritif- un milieu nutritif dense pour l'isolement de Vibrio cholerae.
Composition de haute qualité, assez nutritive et favorise la formation rapide de colonies Vibrio, tandis que le pyrosulfite de sodium supprime partiellement la microflore qui l'accompagne.
Le facteur sélectif est une augmentation du pH, qui supprime finalement le développement de micro-organismes étrangers et n'affecte pas la croissance de l'agent pathogène du choléra.

Milieu nutritif Caractéristiques techniques de la gélose alcaline

Le facteur sélectif est une augmentation du pH, qui supprime finalement le développement de micro-organismes étrangers et n'affecte pas la croissance de l'agent pathogène du choléra.
La culture est réalisée à 37°C pendant 12-14 heures.

Composition de la gélose alcaline :
Hydrolysat pancréatique de farine de poisson, peptone enzymatique sèche, extrait de levure, glucose, phosphate disodique, chlorure de sodium, métabisulfite de sodium, carbonate de sodium, gélose.

Préparation de la gélose alcaline :
Le médicament en quantité nécessaire à la préparation d'une série spécifique de milieu nutritif est agité dans 1 litre d'eau distillée, bouilli jusqu'à ce que la gélose soit complètement fondue, filtrée sur un filtre en gaze de coton, versée dans des bouteilles et stérilisée par autoclave pendant 20 minutes à température température
(121 ± 1) °C.
Le milieu nutritif préparé est transparent et de couleur jaune. Une légère opalescence est autorisée.
pH 8,0 ± 0,2
Le milieu préparé peut être conservé pendant 10 à 14 jours à une température de 2 à 8 °C dans un endroit à l'abri de la lumière.

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• Ph-mètres et ionomètres ;
• armoires de séchage et fours à moufle ;
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• distillateurs, etc.

Liste de la documentation de l'équipement :

• Manuel d'utilisation
• Instructions d'installation
• Instructions d'installation et d'entretien
• Instructions d'installation et d'utilisation
• Instructions de réglage
• Instructions d'entretien et de réparation
• Manuel de formation
• Manuel d'utilisation et d'entretien
• Instructions de réparation (schéma électrique)
• Instructions d'entretien
• Installation Manuel
• Manuel d'entretien et d'installation
• Instructions d'utilisation et d'entretien
• Mode d'emploi
• Méthode de vérification
• Schéma électrique
• Manuel de l'Utilisateur
• Instructions de réparation
• Catalogue (éléments, pièces détachées, etc.)
• Méthode d'essai
• Méthode de réglage
• Méthode de calcul
• Matériel méthodologique
• Passeport
• Logiciel
• Recommandations de réparation
• Guide de l'administrateur
• Guide de l'opérateur
• Manutention manuelle
• Installation Manuel
• Manuel d'installation et d'entretien
• Guide de l'utilisateur
• Service manuel
• Manuel de référence
• Documentation technique/Manuel
• Caractéristiques
• Caractéristiques
• Description technique
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Vitamines à des doses précisément prescrites. Ils utilisent des acides aminés comme sources d'azote. L'avantage de ces milieux est qu'ils ont une composition constante, ils peuvent être utilisés pour déterminer les besoins des microbes en certains nutriments.

Les milieux nutritifs solides sont préparés à partir de milieux liquides avec l'ajout d'un scellant. L'agar-agar est généralement utilisé comme scellant. Agar-agar- un produit obtenu à partir d'algues, qui se présente sous la forme d'une poudre ou de plaques jaunâtres, contient un poids moléculaire élevé polysaccharides, n'est pas décomposé par la plupart des micro-organismes, n'est pas détruit lors de l'autoclavage, ne modifie pas la valeur nutritionnelle du milieu et ne supprime pas la croissance des microbes. Pour les domaines immunologiques et bactériologiques, on utilise de la gélose congelée et clarifiée qui, lorsqu'elle est bouillie ou autoclavée d'un mélange de poudre et d'eau, fond à une température de 85-100 ° C et, lorsqu'elle est refroidie à 45-48 ° C, forme un gel.

Pour préparer des milieux nutritifs denses, de l'agar-agar est ajouté à une concentration de 1,5 à 3 %.

Environnements simples.

Bouillon de viande et de peptone (MPB) est la base protéique de tous les milieux.

Il existe plusieurs façons de préparer le MPB :

a) dans de l'eau de viande additionnée de peptone prête à l'emploi - c'est ce qu'on appelle le bouillon de viande-peptone ;

b) sur la digestion des produits d'hydrolyse des matières premières à l'aide d'enzymes ( trypsine- Bouillon Hottinger, pepsine- Le bouillon de Martin).

Ils sont pratiques pour le transport, peuvent être stockés pendant une longue période, soulagent les laboratoires de l'énorme processus de préparation des milieux et les rapprochent de la résolution du problème de la normalisation des milieux. L'industrie médicale produit des milieux secs Endo, Levin, Ploskirev, de la gélose au sulfite de bismuth, de la gélose nutritive, des glucides avec indicateur BP et autres.

Thermostats

Les thermostats sont utilisés pour cultiver des micro-organismes.

Thermostat- Il s'agit d'un appareil dans lequel une température constante est maintenue. L'appareil est constitué d'un radiateur, d'une chambre, de doubles parois, entre lesquelles circule de l'air ou de l'eau. La température est régulée par un thermostat. La température optimale pour la reproduction de la plupart des micro-organismes est de 37°C.

Méthode de préparation de la gélose sur plaque

Le MPA est fondu dans un bain-marie, puis refroidi à 50-55°C. Le goulot de la bouteille est brûlé à la flamme d'une lampe à alcool, les boîtes de Pétri sont ouvertes pour que le goulot de la bouteille rentre sans toucher les bords de la boîte, on y verse 10-15 ml de MPA, le couvercle est fermée, la coupelle est secouée pour que le milieu soit uniformément réparti, et laissée sur une surface horizontale jusqu'à ce qu'elle durcisse. Après séchage, les plaques de gélose sont conservées au froid.

Semis en boucle

A l'aide d'une anse stérile refroidie, prélever une goutte de matériel, ouvrir un bord de la coupelle avec la main gauche, ramener l'anse à l'intérieur et faire quelques passages au même endroit avec une anse au bord opposé, puis arracher l'anse et inoculer le matériau par mouvements parallèles d'un bord à l'autre de la coupelle avec un intervalle de 5 à 6 mm. Au début du semis, lorsqu'il y a beaucoup de microbes sur l'anse, ils donneront une croissance confluente, mais à chaque passage il y aura de moins en moins de microbes sur l'anse, et ils resteront solitaires et produiront des colonies isolées.

Semis selon la méthode Drigalsky

Cette méthode est utilisée lors de l'inoculation de matériel fortement contaminé par la microflore (pus, matières fécales, crachats). Pour semer selon la méthode Drigalsky, munissez-vous d'une spatule et de plusieurs coupelles (3-4). Couteau à mastic- il s'agit d'un instrument constitué d'un fil métallique ou d'une fléchette en verre, courbé en forme de triangle ou de L. Le matériau est introduit dans le premier gobelet avec une anse ou une pipette et réparti uniformément avec une spatule sur la surface du milieu ; avec la même spatule, sans le brûler, le matériau est frotté dans le milieu nutritif dans le deuxième gobelet, puis Dans le troisième. Avec un tel semis, la première coupelle aura une croissance confluente et des colonies isolées se développeront dans les coupelles suivantes.

Isolement de la culture pure selon Chtchukevitch

Pour le semis, prenez un milieu nutritif fraîchement préparé avec du condensat. Le matériel à tester est prélevé à l'aide d'une anse et introduit soigneusement, en respectant les règles d'asepsie, sans toucher le milieu et les parois, dans l'eau de condensation. Les bactéries à forte mobilité « rampent » sur la surface humide de la gélose inclinée.

Grâce à un travail indépendant, l'étudiant doit savoir :

1. Classification, morphologie des champignons, leurs méthodes d'étude.

2. Classification et morphologie des actinomycètes.

3. Règles des régimes anti-épidémiques et précautions de sécurité.

Être capable de:

1. Différencier les micro-organismes par microscopie.

2. Microscopez les préparations colorées.

3. Désinfectez le matériel, traitez vos mains avec des désinfectants.

4. Préparez des préparations à partir de cultures pures.

Gélose au sang pour test CAMP. À 2 % de gélose nutritive, pH 7,4-7,6, ajouter 0,2 % de glucose et de mouton ou de gros globules rouges bétail. Les globules rouges du sang citraté sont lavés trois fois avec une solution isotonique de chlorure de sodium pour éliminer l'antihémolysine éventuellement contenue dans le sérum, puis ils sont remis en suspension dans la même solution au volume sanguin d'origine. Une suspension de globules rouges à 5 % est ajoutée à la gélose.

Gélose biliaire alcaline (ci-après dénommée BAL). Gélose nutritive sèche - 35,0 g ; autolysat de levure - 20,0 ml; glucose - 10,0 g; eau distillée - 600 ml. La gélose est fondue, filtrée, de la bile bovine fraîche - 400,0 ml et du carbonate de sodium - 5,0 g sont ajoutés.

Stériliser le milieu préparé en autoclave à 112 0 C pendant 15 minutes. Avant de verser dans des coupelles, 50,0 ml de sang frais (de mouton, de lapin ou humain), 12,5 ml d'une solution de cristal violet à 0,01% et 20 ml de solution d'hydroxyde de potassium (ci-après dénommé KOH) sont ajoutés au milieu.

Lait au bleu de méthylène. Le lait frais est porté à ébullition, laissé pendant une journée, retiré de la crème, bouilli une seconde fois, laissé à nouveau pendant une journée et la couche supérieure est retirée une seconde fois. Le lait écrémé est filtré sur une épaisse couche de coton et alcalinisé avec une solution de carbonate de sodium à 10 % jusqu'à pH 7,2. A 100 ml de lait ajouter 2,0 ml de 1% solution aqueuse bleu de méthylène. Le milieu ainsi préparé est versé dans 5,0 ml dans des tubes à essai stériles et stérilisé à la vapeur courante pendant 3 jours pendant 30 minutes.

Milieu de diagnostic différentiel entérococcique (EDDS). Gélose nutritive sèche - 35 g, autolysat de levure pour préparer les milieux nutritifs - 20 ml, glucose - 10 g, eau distillée - 800 ml. Faire fondre à chaud, filtrer, stériliser à 112 0 C en autoclave pendant 15 minutes, pH 7,2-7,4.

Avant de verser dans des tasses, TTX - 0,1 g est ajouté au milieu nutritif ; solution aqueuse de cristal violet 0,01% - 12,5 ml; acide nalidixique - 0,1 g; lait écrémé stérile, chauffé à 44-45 0 C - 200 ml ; sang frais défibriné (animal ou humain) - 50 ml. Le contenu est soigneusement agité et versé dans des tasses de 7 ml.

Gélose nutritive sucre-levure avec tellurite de potassium. Gélose nutritive sèche - 35 g, autolysat de levure - 20 ml, glucose - 10 g, eau distillée - 1000 ml. Le mélange préparé est fondu lorsqu'il est chauffé, du citrate de sodium est ajouté - 5,0 g. Le milieu est stérilisé à 112 0. C pendant 15 minutes, pH 7,2-7,4. Avant de verser le milieu dans des coupelles stériles, ajouter 50 ml de sérum de cheval, 0,1 g d'acide nalidixique et 0,7 g (35 ml d'une solution aqueuse à 2 %) de tellurite de potassium et bien mélanger.

Bouillon nutritif avec glucose. A 100 ml de bouillon nutritif, pH 7,2-7,4, ajouter 0,2 g de glucose.

Le milieu préparé est stérilisé par fractions pendant 3 jours consécutifs pendant 20 minutes ou une fois pendant 15 minutes à 0,5 atm. dans un autoclave.

Gélose au sang 5%. Ajouter 100 ml de gélose nutritive à 2%, fondue et refroidie à 45 degrés. C, pH 7,4-7,6, en respectant les règles d'asepsie, ajouter 5 ml de sang défibriné d'agneau, de cheval ou de lapin. Le mélange est soigneusement mélangé et versé dans des tasses en une couche de 3 à 4 mm.

Informations connexes :

1. III. Facteurs microenvironnementaux de l'industrie touristique dans la région de Voronej
2. Réglementation administrative et juridique de la protection de l'environnement. Statut administratif et juridique des autorités environnementales